异羟肟酸的合成方法？

　　苯异羟肟酸类化合物的合成

　　1. 乙酯的制备 取不同取代基团的苯甲酸各0.2mol，溶于100ml乙醇中，加入10g催化剂和10ml带水剂，回流4～8h(不同原料回流时间不同)，减压蒸馏除去溶剂，得到黄色溶液，用Na 2 CO 3 调pH至碱性，再用己烷萃取，蒸去己烷得乙酯的粗产品，若产品为液体，将粗产品减压蒸馏，收集所需要的馏分，得纯品;若产品是固体，通过过滤、水洗得到纯品。产品用GC/MS分析，确定是我们所需要的化合物纯度为99%，产率为85%。

　　2. 苯异羟肟酸的制备 将20gNaOH溶于50ml30%乙醇中，将0.2mol的盐酸羟胺溶于50ml30%乙醇中，再将两者混合搅拌2h，使NaOH与盐酸羟胺完全反应，然后冷却至0℃，过滤，在滤液中加入0.1mol乙酯，50℃下放置4h，用稀H 2 SO 4 调至pH为6.0，有浅粉红色固体析出，过滤得粗产品，用水-乙醇重结晶得纯品，产率为80%，产品经高效液相色谱分析，得纯度为99.2%，通过熔点测定仪、付里叶变换红外光谱仪、核磁共振波谱仪、元素分析仪的分析，确定了五种化合物的结构。

　　3. MTT实验

　　将所合成的化合物用生理盐水配成母液，-20℃冰箱保存备用，每种化合物均设0.1、1.0、10×PPC三个浓度，临用前配制。将肿瘤细胞浓度调为10 4 ～10 5 个/ml，并置于96孔平底培养板中(100ml/孔)，加入不同浓度的化合物10μl/孔，每个浓度设3个平行孔，对照孔不加药。震荡10min后，置37℃，5%湿化CO 2 培养箱中培养3天，加入MTT(5mg/ml)20μl/孔，继续培养4h，用快速翻板法 〔8〕 去除培养液及药液，加入DMSO100μl/孔，震荡10min，用酶标仪测OD值(λ490nm)，计算抑制率。

　　抑制率=(1-对照孔平均吸收加药孔平均吸收)×100%，当抑制率≥50%时，判断该药敏感。

　　4.结果

　　(1)用一种肿瘤细胞在每孔(0.2～1.1)×10 5 范围内，细胞数与MTT甲月赞化合物的比值正相关，不同肿瘤细胞产生的MTT甲月赞化合物量差异较大。(2)所合成的化合物的体外抑瘤率与细胞种类无关。(3)5种化合物A、B、C、D、E中，其中E的抑瘤率最大，平均达到77.1%(Hela、SGC-7910、8910、8910PM和BGC-823的抑制率的平均值)。化合物B的抑瘤率为最低，平均达到37.8%。